التحضيرات المجهرية الضوئية تأليف الأستاذ الدكتور حميد احمد الحاج

وقع من الطلبة الذين يدرسون مادة التحضير المجهري، إعداد شرائح مجهرية تساعد في دراسة الخلايا والأنسجة والأعضاء. ويمكن إتمام هذا، بأربع طرائق تحضير رئيسية هي: التقطيع والمسح أو الفرش والهرس أو الدعك والتحضيرات الكاملة . وسنوجز فيما يلي هذه الطرائق الأربعة، ومن ثم سيتم تفصيلها بشكل موسع في فصول لاحقة.

1. التقطيع: في هذه الطريقة يتم قطع الأنسجة، إلى مقاطع رقيقة جداً 10mµ)). ولكون كثير من الأنسجة النباتية والحيوانية طرية يصعب قطعها، فيجب أن تقسّى قبل عملية القطع، وذلك بتثبيت النسيج بمواد كيماوية مناسبة لحفظه.

   ولتحضير النسيج للقطع يجب غسل المثبت عنه، ثم إزالة الماء منه، وترويقه، وطمره في الشمع ليتشربه خلال خلاياه. وهكذا يعمل الشمع كدعامة داخل النسيج، تُمكّن من قطعه إلى مقاطع يصل سمكها إلى عشرة ميكرومترات. وبعدها، توضع المقاطع على شرائح مجهرية، وتصبغ وتغطى بأغطية زجاجية رقيقة. وفي الحالات الطارئة، التي يُحتاج فيها إلى شرائح بسرعة، كما في الدراسات المرضية، يمكن الاستغناء عن كل ما سبق ذكره في تحضير المقاطع، بتجميد النسيج الذي يسمى خزعة ثم قطعه وصبغه في الحال.

    والمقاطع تكون إما طولية أو عرضية، أو جبهية (أمامية) .

2.  المسح أو الفرش: في هذه الطريقة، يمسح السائل، كالدم أو البول، أو مزرعة البكتيريا، أو مسحة من الحنجرة أو المهبل، ويفرش كطبقة رقيقة على شريحة زجاجية، ويمكن عمل ذلك من الأنسجة الرخوة الطازجة، كالنخاع الشوكي والحويصلات المنوية. وتصبغ المسحات وتجفف في الهواء ثم تغطى.

3. الهرس أو الدعك: بعض الأنسجة ليست رخوة بدرجة تكفي لفرشها على الشرائح، وليست قاسية بما فيه الكفاية، ليتسنى قطعها دون طمرها في الشمع. لذا، فإن الهرس هو الطريقة المثلى لتحضيرها، وذلك بفصل الخلايا عن بعضها، عبر تفكيك المادة بين الخلوية. وفي العادة، تعمل تحضيرات دائمة أو مؤقتة بهذه الطريقة.

    ومن الأنسجة التي تحضر بهذه الطريقة، الأنسجة النباتية كالقمة النامية للساق والجذر والمبايض والبتلات. ومن الأنسجة الحيوانية الغدد اللعابية لذبابة الفاكهة DrosophilaMelanogaster .

4.  النماذج الكاملة Whole Mounts: في هذه الطريقة توضع العينة كاملة، إذا كانت صغيرة وشفافة بشكل يسمح بوضعها على شريحة، وتجري عليها عليمات التثبيت، وإزالة الماء، والترويق والصبغ والتغطية كما في المقاطع. وهذه الطريقة مفيدة في تحضير الكائنات الأولية أو الطفيليات أو الأجنة الصغيرة.وإذا كانت العينة كبيرة الحجم، فيؤخذ قسم منا يتناسب وحجم الحيّز المتاح على الشريحة.

   سنعالج في الجزء الأول من هذا الكتاب الأسس النظرية لخطوات تحضير الشرائح المجهرية. أما في الجزء الثاني، فسنتعامل مع التطبيقات العملية في هذا المجال.

الجزء الاول: الاسس النظرية

1.  التثبيت

2.  الغسل وإزالة الماء والترويق

3.  التشريب والطمر

4.  تقطيع وتحميل الأنسجة

5.  صبغ الأنسجة

6.  تغطية المقاطع ووسم الشرائح

7.  طرائق المسح والهرس والتجميد

8.  النماذج الكاملة

الجزء الثاني: التطبيقات

9.  الأدوات والزجاجيات

10. الأجهزة اللازمة في التحضير المجهري

11. مزيلات الماء ووسائط الترويق

12.  وسائط التشريب والطمر

13.  محاليل الصبغ والتمييز

14.  وسائط لصق وتغطية المقاطع

15.  تحضير مسحة دم إنسان

16.  تحضير هرسة من الغدد اللعابية لذبابة الفاكهة

17.  تحضير هرسة من قمة جذر البصل

18.  تحضير نماذج كاملة

19.  تحضير مقاطع من أنسجة حيوانية

20.  تحضير مقاطع من أنسجة نباتية

21.  تحضير مقاطع متسلسلة